在环境中，微生物起到了重要的作用，而这些作用往往是由微生物的相关功能基因来决定的。比如，氮循环相关功能微生物在土壤发挥其生态功能中起着重要的作用，固氮细菌、反硝化细菌和硝化细菌在石油污染土壤生物修复过程中的演变情况，研究者利用实时定量PCR技术对其相关功能基因nifH、narG和amoA进行检测，再利用标准曲线计算获得基因的绝对拷贝数。此类研究可以表明结果表明氮循环功能基因的动态监测可以从基因和物种水平上反映土壤修复的效果，为土壤修复的监控和效果评估提供参考。

1、实时监测：通过扩增曲线能够实时监测PCR产物的积累。

2、特异性强：实验完成后，溶解曲线的分析可以验证扩增产物的特异性，降低假阳性。

3、精确定量：利用扩增进入指数增长期的CT值来定量测定起始模板量，从而实现了极为精确的核酸定量检测。可以十分方便的知道目的基因的含量。

1. 技术重复质量评估分析；

2. 绝对量计算

　公式（copies/µl）=[质粒浓度（ng/ul）×10-9×6.02×1023] / [ 克隆产物碱基数×660（g/mol）]

　载体（pMD 18-T）碱基数 = 2692 bp

3. 对于有生物学重复的检测，计算SD和p-value。

（一）样品类型

　　1. 总DNA；样品浓度：≥10 ng/ul；样品总量：>1ug；样品纯度： OD260/280为1.8~2.2，OD260/230≥1.0，260nm处有正常峰值。RNA完整性： 电泳检测28S/18S≥1.5。

　　2. 组织：样品取样后立即液氮速冻，保存于液氮或超低温冰箱中。请尽量使用新制备的样品且样品量至少满足3次以上提取；

（二）样本运输

　　1. 样本取样后置于冻存管中并标注，使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

1、Abundance of denitrifying genes coding for nitrate (narG), nitrite (nirS), and nitrous oxide (nosZ) reductases in estuarine versus wastewater effluent-fed constructed wetlands. Kyongmi Chon, Jin-Soo Chang, Eunkyung Lee, Jinwook Lee, Jiyoung Ryu, Jaeweon Cho. Ecological Engineering, 2011, 37:64-69