定量PCR（即时聚合酶链锁反应，Real-time Polymerase Chain Reaction，简称 Real-time PCR、即时PCR），又称定量即时聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction，简称即时定量PCR）。定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。该技术可以准确的检测基因的相对表达量和绝对表达量，被广泛地应用与基因表达水平的研究。同时，它也作为一些组学技术的验证，比如转录组测序、表达芯片等实验结果验证。

1. 技术重复质量评估分析；

2. Ct值计算

　△Ct（Treated）= CT（Treated_gene A）-CT（Treated_housekeeping gene）

　△Ct（Control）= CT（Control_gene A）-CT（Control_ housekeeping gene）

　△△Ct=△Ct（Treated）-△Ct（Control）

3. 对于有生物学重复的检测，计算SD和p-value。

与RT-PCR相比，荧光定量PCR具有以下技术优势：

1、实时监测：通过扩增曲线能够实时监测PCR产物的积累。

2、特异性强：实验完成后，溶解曲线的分析可以验证扩增产物的特异性，降低假阳性。

3、精确定量：利用扩增进入指数增长期的CT值来定量测定起始模板量，从而实现了极为精确的核酸定量检测。

（一）样品类型

　　1. 总RNA；样品浓度：≥250 ng/ul；样品总量：>5ug；样品纯度： OD260/280为1.8~2.2，OD260/230≥1.0，260nm处有正常峰值。RNA完整性： 电泳检测28S/18S≥1.5。

　　2. 组织：样品取样后立即液氮速冻，保存于液氮或超低温冰箱中。请尽量使用新制备的样品且样品量至少满足3次以上提取；

（二）样本运输

　　1. 总RNA样品请溶于RNase-free H2O或乙醇中，置于1.5 ml RNase-free离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm封口，干冰运输；

　　2. 样本取样后置于冻存管中并标注，使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

1、Pleiotropic effects of RecQ in Deinococcus radiodurans. Chen H, Huang L, Hua X, Yin L, Hu Y, Wang C, Chen W, Yu X, Xu Z, Tian B, Hu S, Hua Y. Genomics. 2009 Nov;94(5):333-40.

2、DR2539 is a novel DtxR-like regulator of Mn/Fe ion homeostasis and antioxidant enzyme in Deinococcus radiodurans. Chen H, Wu R, Xu G, Fang X, Qiu X, Guo H, Tian B, Hua Y. Biochem Biophys Res Commun. 2010 May 28;396(2):413-8.

3、DdrB stimulates single-stranded DNA annealing and facilitates RecA-independent DNA repair in Deinococcus radiodurans. Xu G, Lu H, Wang L, Chen H, Xu Z, Hu Y, Tian B, Hua Y. DNA Repair (Amst). 2010 Jul 1;9(7):805-12.

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